使用液相色譜儀的(de)小伙伴肯定會遇到漏(lou)(lou)氣和漏(lou)(lou)液(ye)的(de)狀(zhuang)況，流(liu)動相(xiang)(xiang)是(shi)造成(cheng)液(ye)相(xiang)(xiang)色譜各種問題的(de)***主要源(yuan)頭。液(ye)相(xiang)(xiang)色譜***常見(jian)的(de)故障一是(shi)堵，二是(shi)漏(lou)(lou)。今天***這兩部(bu)分(fen)別展(zhan)開討論(lun)（流(liu)動相(xiang)(xiang)以甲醇為例(li)，色譜柱(zhu)以C18為例(li)）。
首先，為何會堵?“堵”的(de)表(biao)現現象***是柱壓(ya)異常升高，直接原因(yin)***是流路(lu)不暢。堵塞的(de)主(zhu)要位置***是在色譜柱的(de)前端，***主(zhu)要原因(yin)***是流動(dong)相里有雜質，雜質的(de)主(zhu)要來源***是細(xi)菌。
1純水(shui)中的(de)細菌(jun)污染
首先我們要認識(shi)到(dao)，一般的(de)(de)(de)國(guo)產(chan)甲醇(chun)其實不(bu)需要額外(wai)過(guo)(guo)濾(lv)(lv)處(chu)理，直接使用沒有問題(ti)。即(ji)使是(shi)有些(xie)固態微粒(li)雜(za)質(zhi)，也能在(zai)液(ye)相流路系統***前端的(de)(de)(de)過(guo)(guo)濾(lv)(lv)頭上排除，真(zhen)正容(rong)易(yi)引起問題(ti)的(de)(de)(de)，是(shi)水(shui)中的(de)(de)(de)細菌(jun)(jun)。新制(zhi)備的(de)(de)(de)純水(shui)在(zai)室(shi)內放置(zhi)幾天(tian)***會長菌(jun)(jun)，而這(zhe)些(xie)細菌(jun)(jun)雖然(ran)肉眼不(bu)可見，卻足以(yi)堵塞柱填(tian)料顆(ke)粒(li)的(de)(de)(de)空隙，造成(cheng)柱子很快報(bao)廢。這(zhe)***是(shi)在(zai)配制(zhi)流動相時造成(cheng)的(de)(de)(de)細菌(jun)(jun)污染(ran)的(de)(de)(de)原因，解決它的(de)(de)(de)方法很簡單，***是(shi)確保水(shui)的(de)(de)(de)******性(xing)。
解決辦法：
（1）***理想的(de)方式當然(ran)是購買實(shi)驗室專用純水機，既方便又(you)******，質量也放心。******的(de)缺點(dian)***是******不菲(fei)。
（2）成箱購買市售(shou)品牌純凈水，如500ml的(de)(de)(de)怡寶或娃哈哈，這(zhe)些水的(de)(de)(de)質(zhi)(zhi)量(liang)足以應付液相(xiang)色譜的(de)(de)(de)要求。先隨(sui)機抽取一(yi)瓶做一(yi)下(xia)細菌平板實驗，待菌落數合(he)格(ge)方(fang)可(ke)使(shi)用(yong)。這(zhe)樣(yang)每(mei)次只(zhi)要單獨(du)開一(yi)瓶即(ji)可(ke)，也很方(fang)便。每(mei)次成本2元左右(you)。這(zhe)里特(te)別指出(chu)一(yi)個(ge)細節：在絕大多數書本上，凡談到配制流(liu)動(dong)相(xiang)都(dou)會談到***后一(yi)個(ge)過濾的(de)(de)(de)步驟。但(dan)是從(cong)我們長(chang)期(qi)使(shi)用(yong)的(de)(de)(de)實際效果來說(shuo)，只(zhi)要能******水的(de)(de)(de)質(zhi)(zhi)量(liang)，這(zhe)一(yi)步******可(ke)以也應當(dang)去除。
水有******，可以不過(guo)濾？
（1）流(liu)(liu)動相(xiang)過濾在理論上有好(hao)處(chu)，但是實際操作時(shi)由(you)于不可(ke)能做到專(zhuan)瓶(ping)專(zhuan)用，反(fan)而(er)容(rong)易造成的交叉污染，對于配比復雜的流(liu)(liu)動相(xiang)影響更(geng)大。
（2）流動相(xiang)過(guo)濾(lv)(lv)(lv)在經濟成本上(shang)不劃算。買一(yi)套過(guo)濾(lv)(lv)(lv)裝置要6000多元，且過(guo)濾(lv)(lv)(lv)器公認是比(bi)較容易損壞(huai)的(de)設備。***主要是過(guo)濾(lv)(lv)(lv)片的(de)成本太高(gao)，一(yi)片***要幾十元。按一(yi)般(ban)液相(xiang)柱的(de)正常使用壽命(ming)計(ji)算，過(guo)濾(lv)(lv)(lv)片的(de)成本會遠遠高(gao)于色譜柱的(de)成本上(shang)升。
2流動相的細菌(jun)污染
流動相(xiang)剛開(kai)始不長菌，在使用時卻產生了細(xi)菌污(wu)染。這主要是(shi)在使用多元液相(xiang)色(se)譜(pu)儀時的一種(zhong)不良使用習(xi)慣造(zao)成的。舉(ju)***簡(jian)單的例子(zi)：50%的甲(jia)醇(chun)水流動相(xiang)，有兩種(zhong)使用方式(shi)。一種(zhong)方式(shi)是(shi)在上機前***配好混合在一起，另一種(zhong)方式(shi)是(shi)在流路(lu)A放純甲(jia)醇(chun)，流路(lu)B放純水。從(cong)單純實驗(yan)(yan)效(xiao)果來說(shuo)，后一種(zhong)有明顯的優點：首先是(shi)簡(jian)單，不需要實驗(yan)(yan)者另個計(ji)算配比(bi)混合，其次***是(shi)比(bi)例******，能得到保留(liu)時間重復性(xing)極好實驗(yan)(yan)效(xiao)果。
但是(shi)(shi)，它有(you)(you)一(yi)個致命的(de)缺陷，***是(shi)(shi)純(chun)水(shui)(shui)在流動相(xiang)瓶中幾天時間(jian)***會長細菌（很多(duo)情(qing)況下不(bu)僅(jin)僅(jin)用純(chun)水(shui)(shui)作流動相(xiang)，而是(shi)(shi)用緩沖(chong)鹽溶液(ye)，本身***是(shi)(shi)******肥料(liao)，細菌長得更迅速(su)），一(yi)旦有(you)(you)細菌柱子***壞得很快。所(suo)以(yi)這(zhe)種方式要求(qiu)操作人員每次(ci)實(shi)驗(yan)都要用新制備的(de)純(chun)水(shui)(shui)，更要求(qiu)在每次(ci)實(shi)驗(yan)后(hou)把水(shui)(shui)相(xiang)換(huan)掉，換(huan)成(cheng)甲(jia)醇(chun)沖(chong)洗干凈，這(zhe)一(yi)點在實(shi)際工作中很多(duo)人意(yi)識不(bu)強，***是(shi)(shi)意(yi)識到了但多(duo)次(ci)使用中總有(you)(you)一(yi)兩(liang)次(ci)會遺漏，但是(shi)(shi)往往這(zhe)一(yi)兩(liang)次(ci)***足以(yi)產生致命的(de)影(ying)響(xiang)。因為液(ye)相(xiang)色譜柱的(de)堵塞是(shi)(shi)不(bu)可逆的(de)。
所以，寧可犧(xi)牲小小的(de)(de)保留時間的(de)(de)重復性(xing)，也不要用純(chun)水溶液作(zuo)為流(liu)(liu)動(dong)相(xiang)。從實(shi)(shi)際實(shi)(shi)驗(yan)(yan)效果來說(shuo)，我(wo)建議用10%的(de)(de)甲醇(chun)(chun)水代替水溶液（以前(qian)我(wo)做過不同比例甲醇(chun)(chun)水的(de)(de)細菌(jun)總數實(shi)(shi)驗(yan)(yan)，在5%***基本可以抑菌(jun)，在10%及以上(shang)***可以******殺菌(jun)了），這(zhe)樣可以有(you)效排除長細菌(jun)的(de)(de)隱患，既可作(zuo)流(liu)(liu)動(dong)相(xiang)，也可沖柱。***算是(shi)在配制流(liu)(liu)動(dong)相(xiang)時會(hui)計算得(de)麻(ma)煩(fan)一(yi)些，但是(shi)一(yi)次麻(ma)煩(fan)，終身受益。
3不適當操作
（1）在更換零件時選擇的(de)型號有誤，接(jie)口不(bu)是很匹配，在擰(ning)緊的(de)時候產生(sheng)變(bian)形而使得管路堵(du)塞。
（2）樣品處(chu)理液凈(jing)化得不(bu)干(gan)凈(jing)，長期會(hui)在六通閥和(he)柱之間形阻塞(sai)不(bu)暢。
（3）在使用(yong)用(yong)手動六通(tong)閥時(shi)，有些人(ren)可能(neng)由于(yu)(yu)手勁小的原因，轉動的不到位，于(yu)(yu)是(shi)造成(cheng)流路形成(cheng)死堵(du)，壓力(li)快(kuai)速升高超過警(jing)戒值。
（4）在(zai)使用金(jin)屬管路作出廢液管時(shi)，應(ying)當注(zhu)意******廢液瓶中先放一些(xie)水，并把廢液管的(de)出口端結晶成(cheng)(cheng)塊并造成(cheng)(cheng)堵塞。這種情況不常見，但(dan)卻(que)的(de)確發(fa)生過。
查堵的方法
在發生“堵”的現象后，***需要找(zhao)出原因，主(zhu)要是(shi)什么位置發生了“堵”。
注意(yi)，絕大多數情況下，整個(ge)系統只會有一個(ge)地方發(fa)生(sheng)堵塞(sai)。查堵的(de)(de)(de)(de)方法是從尾(wei)向前(qian)逆(ni)向分(fen)段拆開，仔細觀察壓力數值(zhi)，如果某一個(ge)部件（柱子除外）裝上和拆下時的(de)(de)(de)(de)壓力差別很大，可發(fa)展變化判斷。至(zhi)于柱的(de)(de)(de)(de)堵塞(sai)，可以(yi)通(tong)過換同樣規格的(de)(de)(de)(de)柱的(de)(de)(de)(de)壓力是否一致來判斷。
“漏”分兩種：漏液和漏氣。
漏(lou)液，液相(xiang)色譜(pu)儀從流(liu)動相(xiang)瓶(ping)到廢(fei)液瓶(ping)之間的流(liu)路是一個全封閉體系，內部(bu)壓力(li)很高，但外部(bu)卻能******一滴(di)不漏(lou)。如果某個部(bu)件發生漏(lou)液，那(nei)***是故(gu)障所在。漏(lou)液的原因分兩種(zhong)：
1、接觸硬件不當
在更換零件(jian)如流(liu)路(lu)管(guan)或(huo)換柱時，換的(de)接(jie)頭接(jie)口(kou)不(bu)匹配(pei)，造(zao)成漏(lou)液。要注意不(bu)同公(gong)司的(de)柱子接(jie)頭很多(duo)是(shi)(shi)(shi)不(bu)同的(de)，甚至同一(yi)家公(gong)司在不(bu)同時期生產的(de)液相柱接(jie)頭也有很大(da)區(qu)別。當然選項(xiang)用PEEK接(jie)頭是(shi)(shi)(shi)一(yi)較(jiao)好(hao)(hao)是(shi)(shi)(shi)一(yi)個(ge)較(jiao)好(hao)(hao)的(de)解決方法(fa)，不(bu)僅通用性(xing)好(hao)(hao)，而且靠手(shou)擰(ning)***能******不(bu)漏(lou)液。即使是(shi)(shi)(shi)接(jie)口(kou)本身是(shi)(shi)(shi)匹配(pei)的(de)，但是(shi)(shi)(shi)如果操作不(bu)當也會(hui)漏(lou)液，一(yi)種不(bu)當***是(shi)(shi)(shi)力度把(ba)握(wo)不(bu)好(hao)(hao)，擰(ning)得太緊或(huo)太松；
另一種不當***是致命的錯(cuo)誤：滑絲(si)(si)，這(zhe)往(wang)(wang)往(wang)(wang)是動手(shou)能(neng)力不太強，螺(luo)絲(si)(si)釘很少擰的工(gong)作者犯(fan)的錯(cuo)誤，滑絲(si)(si)的后(hou)果不僅是漏液(ye)那(nei)么簡單，常造成重要部件的報廢(fei)。解決這(zhe)個(ge)問(wen)題只能(neng)靠惡(e)補基本功來實驗，那(nei)***是擰螺(luo)絲(si)(si)。
2、使用儀器不當
只要(yao)互相(xiang)(xiang)有(you)10%比(bi)例(li)***不(bu)(bu)(bu)(bu)(bu)會出現這(zhe)個問題。另一原因是(shi)(shi)(shi)在用(yong)緩沖液(ye)(ye)鹽(yan)溶液(ye)(ye)（不(bu)(bu)(bu)(bu)(bu)論甲醇含(han)量有(you)多少）作流動(dong)相(xiang)(xiang)時，實驗(yan)結束后沒(mei)有(you)換(huan)甲醇水沖洗(xi)，使(shi)(shi)得微滲的(de)流動(dong)相(xiang)(xiang)干燥形成(cheng)晶體造成(cheng)。不(bu)(bu)(bu)(bu)(bu)過(guo)，輸送泵漏液(ye)(ye)并(bing)不(bu)(bu)(bu)(bu)(bu)是(shi)(shi)(shi)非得馬(ma)上(shang)修不(bu)(bu)(bu)(bu)(bu)可(ke)，沖洗(xi)干凈(jing)并(bing)在以后的(de)使(shi)(shi)用(yong)中多加小心一般都可(ke)以正常使(shi)(shi)用(yong)。檢(jian)測器漏液(ye)(ye)是(shi)(shi)(shi)個很麻(ma)煩的(de)事，一般都是(shi)(shi)(shi)吸收池的(de)問題，更(geng)換(huan)的(de)費(fei)用(yong)相(xiang)(xiang)當(dang)高。但(dan)是(shi)(shi)(shi)并(bing)不(bu)(bu)(bu)(bu)(bu)是(shi)(shi)(shi)說一定要(yao)馬(ma)上(shang)更(geng)換(huan)，還可(ke)以從(cong)實際(ji)實驗(yan)效果(guo)看能否(fou)湊合使(shi)(shi)用(yong)。
漏氣(qi)，漏液是從內部(bu)(bu)向外漏，而漏氣(qi)則是外部(bu)(bu)了(le)的氣(qi)體(ti)進入液相色譜儀的流(liu)路內部(bu)(bu)形成氣(qi)泡(pao)。下面按(an)流(liu)路的方向逐(zhu)個部(bu)(bu)件分析產生氣(qi)泡(pao)的原因和相應解決方法。
1、過濾頭
做油液(ye)時，在流路管中有不規則但持續的(de)小氣(qi)泡產生，這(zhe)時考慮的(de)是(shi)(shi)流動相(xiang)有沒有脫(tuo)(tuo)氣(qi)（需要(yao)特別提(ti)醒即使(shi)是(shi)(shi)有了真空脫(tuo)(tuo)氣(qi)機也是(shi)(shi)要(yao)先超聲(sheng)脫(tuo)(tuo)氣(qi)的(de)，起碼可以減少(shao)脫(tuo)(tuo)氣(qi)機的(de)工作壓力并(bing)提(ti)高工作效率），如(ru)果(guo)已脫(tuo)(tuo)氣(qi)，則要(yao)注(zhu)意過濾頭的(de)污(wu)染也會(hui)造成這(zhe)種現象(xiang)。處理方法(fa)比(bi)較簡單，擰下過濾頭在稀硝酸中浸泡，超聲(sheng)半小時，洗凈后(hou)裝回去即可。
2、透明(ming)流路管
指(zhi)的(de)(de)是(shi)(shi)(shi)在過(guo)濾頭和輸送泵(beng)之間的(de)(de)那(nei)一(yi)(yi)段管(guan)路(lu)(lu)(lu)。這(zhe)(zhe)一(yi)(yi)個部分往往不(bu)(bu)(bu)(bu)是(shi)(shi)(shi)有點(dian)氣(qi)泡，而經常是(shi)(shi)(shi)整個管(guan)中全是(shi)(shi)(shi)空氣(qi)而操作(zuo)人員卻渾然不(bu)(bu)(bu)(bu)知，以致輸送泵(beng)工作(zuo)了半天(tian)才發現流動(dong)相(xiang)瓶里的(de)(de)液(ye)(ye)體(ti)一(yi)(yi)點(dian)也沒少。這(zhe)(zhe)也是(shi)(shi)(shi)我(wo)們(men)常說的(de)(de)液(ye)(ye)相(xiang)色譜儀(yi)至少一(yi)(yi)周要(yao)開(kai)機一(yi)(yi)次(ci)的(de)(de)原因（我(wo)們(men)做液(ye)(ye)相(xiang)一(yi)(yi)定要(yao)有“微滲”的(de)(de)概(gai)論）。如果(guo)長時(shi)間不(bu)(bu)(bu)(bu)用(yong)，這(zhe)(zhe)一(yi)(yi)段管(guan)路(lu)(lu)(lu)的(de)(de)液(ye)(ye)體(ti)會******干掉，而充滿(man)空氣(qi)的(de)(de)管(guan)路(lu)(lu)(lu)和充滿(man)液(ye)(ye)體(ti)的(de)(de)管(guan)路(lu)(lu)(lu)不(bu)(bu)(bu)(bu)仔細(xi)看是(shi)(shi)(shi)分辨不(bu)(bu)(bu)(bu)出來(lai)的(de)(de)。這(zhe)(zhe)種情況對于輸送泵(beng)很危險，因為泵(beng)從設計來(lai)說是(shi)(shi)(shi)輸送液(ye)(ye)體(ti)而不(bu)(bu)(bu)(bu)是(shi)(shi)(shi)輸送氣(qi)體(ti)，內部的(de)(de)液(ye)(ye)體(ti)對于活塞來(lai)說起到了機油(you)的(de)(de)作(zuo)用(yong)，如果(guo)活塞桿還(huan)殘存了一(yi)(yi)些緩(huan)沖鹽，則極易(yi)拉傷(shang)，造成不(bu)(bu)(bu)(bu)可(ke)逆(ni)轉的(de)(de)影響。
對(dui)于這種情(qing)況，要突出(chu)“預防為(wei)主”如：液相(xiang)色譜使用人(ren)員(yuan)要相(xiang)對(dui)固定和穩(wen)定，工作中合理(li)搭配資源(yuan)，每(mei)臺機一周(zhou)至少一次實驗，如長期不用起碼每(mei)周(zhou)要沖流動相(xiang)2小時。養成良(liang)好(hao)的工作習慣很重(zhong)要。
如(ru)果流(liu)路管中(zhong)真(zhen)漏氣了怎么辦？
我的(de)建議是用外力使(shi)管路中充滿液體。
具體如下：
1、找到流路管進入輸(shu)送泵的接頭。
2、擰下來。
3、用一干凈洗耳球的******對準管(guan)路的平(ping)整切口。
4、吸液(ye)體，看(kan)液(ye)面(mian)從流動相瓶里上升(sheng)，至離洗(xi)耳球5cm左(zuo)右(you)時停止該動作。
5、快速把接頭擰回輸(shu)送泵上（這(zhe)個過程(cheng)可能會有(you)少許流動相外(wai)泄，這(zhe)是(shi)正常現象）。
6、開(kai)機，打開(kai)排液(ye)閥門，啟動輸送泵。
7、等排液(ye)管中流出的溶(rong)液(ye)沒有氣泡時(shi)，再(zai)關閉(bi)排液(ye)閥，儀器正常工作。
3、輸送(song)泵和柱子(zi)
這(zhe)些部分進了氣泡一般不怕(pa)，沖掉(diao)***行(xing)。
4、檢測器
應該說，整(zheng)個(ge)(ge)流路中只要有(you)一個(ge)(ge)氣(qi)(qi)泡(pao)都會在(zai)檢(jian)(jian)測(ce)器(qi)上得到強烈(lie)的(de)(de)信號(hao)反(fan)映，檢(jian)(jian)測(ce)器(qi)內部的(de)(de)氣(qi)(qi)泡(pao)一般都能(neng)被沖(chong)(chong)走，但也有(you)很難沖(chong)(chong)掉(diao)的(de)(de)殘留氣(qi)(qi)泡(pao)的(de)(de)情(qing)況。如果(guo)(guo)檢(jian)(jian)測(ce)器(qi)內有(you)殘留氣(qi)(qi)泡(pao)，會有(you)特別明(ming)顯的(de)(de)表現形(xing)式，***是(shi)在(zai)走基線時(shi)會時(shi)不時(shi)間(jian)隔出現直上直下信號(hao)很大的(de)(de)信號(hao)峰。這時(shi)先看普通流量(liang)能(neng)否(fou)沖(chong)(chong)走，如果(guo)(guo)沖(chong)(chong)不走，那******的(de)(de)辦法(fa)***是(shi)拆(chai)柱(zhu)，把檢(jian)(jian)測(ce)器(qi)直接(jie)連接(jie)到輸送泵的(de)(de)出口，加大幾部流量(liang)沖(chong)(chong)洗，則肯定(ding)能(neng)沖(chong)(chong)走氣(qi)(qi)泡(pao)。
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